二战时期，希特勒在世界各地召集考古学家寻觅“丧失的约柜”——圣经中引导希伯来人与上帝交流的圣物，希特勒欲借其来护佑纳粹的战争。
为了使希特勒的方案破灭，印第安纳琼斯博士（Harrison Ford饰）奔赴尼泊尔，一边奋力开掘蛛丝马迹，一边还要与无孔不入的纳粹分子周旋。仰仗着过人的智慧和异于常人的胆量及大无畏的勇气，琼斯终在罗马找到了指示约柜位置的太阳手杖，继而发现了约柜。
就在前功尽弃之际，纳粹军却并吞了成功果实，还将琼斯等人留在了蛇穴里！但是无往不胜的琼斯总是有方法九死一生，并狠狠地还以颜色！
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